بررسی تولید سودوویروس پاپیلومای انسانی ژنوتیپ 16 در رده سلولی پستانداران

سرطان دهانه رحم شایع ترین نوع سرطان موثر بر زنان در کشورهای در حال توسعه می باشد که توسط عفونت با ویروس پاپیلومای انسانی(hpv) ایجاد می شود. بیش از 50? از سرطان های دهانه رحم در سراسر جهان به hpv16 نسبت داده شده است. l1پروتئین عمده کپسید و l2 پروتئین جزئی کپسید hpv است. پروتئینl1 قادر است به صورت خود به خودی به ذرات شبه ویروسی (vlp) فاقد dna ژنومی مونتاژ شود. در حال حاضر امیدوار کننده ترین واکسن علیه عفونت hpv16 ، بر پایه پروتئین l1 است. واکسن های کنونی دارای نقاط ضعف اساسی مانند محدودیت به نوع و هزینه نسبتا بالای تولید هستند، بنابراین تلاش جهت توسعه نسل دوم واکسن های hpv در حال انجام است. یکی از واکسن های نسل دوم hpv بر پایه پروتئین l2 است که طیف وسیعی از پاسخ ایمنی را علیه انواع بیشتری از hpv القا می کند. از جمله ابزارهایی که برای بررسی ایمنی زایی این واکسن لازم است، سودوویریون هایی هستند که از پروتئین های l1 و l2 ویروسی تشکیل شده اند که این سودوویریون ها در حالیکه توانایی ورود به سلول را دارند، قابلیت عفونت زایی ندارند. در این پژوهش باکتری e.coli سویه dh5? با پلاسمید کد کننده پروتئین l1 و l2 ازhpv16 ترانسفورم شد. پس از استخراج این پلاسمید، صحت آن با آنزیم اندونوکلئاز محدودالاثر hindiii تایید شد. به منظور ارزیابی بیان سودوویرونهای hpv16، این پلاسمید به همراه پلاسمید گزارشگر pegfp-n1 و به کمک کلسیم فسفات در سلول های یوکاریوتی 293ft ترانسفکت شد. پس از تخلیص سودوویریون ها از عصاره سلولی و آلوده سازی سلول های 293ft توسط آنها، ورود آنها در این سلول ها با میکروسکوپ فلورسنت و فلوسایتومتری مورد بررسی قرار گرفت. ساخت موفق این سودوویریونها علاوه بر کمک به بررسی ایمنی زایی واکسنهای نسل دوم hpv، راه را برای استفاده از این ابزار بعنوان وکتور ژن درمانی باز می نماید.